1. ** ：**在普通倒置顯微鏡下為黑色細(xì)沙狀，根據(jù)感染**的不同，可有不同的外形，培養(yǎng)液一般會渾濁變黃，對細(xì)胞生長影響明顯。

解決方法 ：仔細(xì)檢查一下器皿的**情況，是否在高壓**時放氣時間足夠，壓力足夠！尤其是和儲存培養(yǎng)液接觸的移液管等物品，連續(xù)兩次污染的話有可能造成儲存液污染，一定要注意！下次使用前檢查一下培養(yǎng)液是否存在渾濁的現(xiàn)象！可在培養(yǎng)液中加相應(yīng)的***處理，如四環(huán)素，慶大霉素，或者鏈霉素。

2. 霉菌 ：培養(yǎng)液是清亮的，倒置顯微鏡下無雜質(zhì)，37度孵箱培養(yǎng)2-3天，仍清亮，但出現(xiàn)絮狀雜質(zhì)，鏡下可見呈細(xì)絲狀的團狀漂浮物，可看到明顯的菌絲，細(xì)胞仍可生長，但時間長之后，細(xì)胞的活力狀態(tài)變差。

解決方法 ：用硫酸銅溶液擦拭CO?孵箱內(nèi)，再把水盤里也加上飽和量的硫酸銅?；蛘咴谂囵B(yǎng)箱的托盤加入飽和的**磷酸氫二鈉高鹽液體,可以防止霉菌污染。

CO?孵箱被霉菌污染后，可把所有細(xì)胞暫時轉(zhuǎn)移，采用過氧乙酸擦洗孵箱（包括隔板，箱壁）。并把過氧乙酸放置在孵箱內(nèi)一個小時，使其蒸汽彌漫。待過氧乙酸的氣味消散后，再移入細(xì)胞。孵箱應(yīng)定期清潔（2月左右），尤其在多雨的季節(jié)。

其它培養(yǎng)箱清洗方法是：用84液擦洗－清水擦洗－75%酒精擦洗－紫外燈照。

預(yù)防霉菌污染，可在培養(yǎng)基里加3u/ml的兩性霉素或制霉菌素或放線菌素D或雙抗；但細(xì)胞一旦污染，很難挽救，制霉菌素或放線菌素D或雙抗都于事無補，建議舍棄該污染細(xì)胞。，將環(huán)境徹底**，如果所有細(xì)胞都污染，可能是系統(tǒng)污染，檢查一下培養(yǎng)基和器材，如果只是個別污染，可能是操作問題，就要注意操作。

3. 支原體 ：黑色的，好象多為多形，培養(yǎng)液一般培養(yǎng)液一般會渾濁，原體感染，國內(nèi)血清很多都沒有做支原體陰性檢測，而支原體是牛血清中*常見的微生物之一。而且它不能用過濾的辦法除去。支原體感染細(xì)胞以后，細(xì)胞病變不很明顯，只是慢慢死去。

解決方法 ：支原體污染細(xì)胞后，特別是重要的細(xì)胞株，有必要**支原體，常用方法有：***處理、抗血清處理、***加抗血清和補體聯(lián)合處理。要注意的是：支原體沒有細(xì)胞壁，故作用于細(xì)胞壁生物合成的***，如內(nèi)酰胺類、萬古霉素等是不敏感的；對多粘菌素、利福平、磺胺**普遍耐火藥。對支原體*有抑制活性***是四環(huán)素類、大環(huán)內(nèi)酯類等，氨基糖苷類、氯霉素對支原體有較小的抑制作用。必要時更換所有培養(yǎng)用物。通常，濾過**的方法對支原體是沒有作用的。

4. 黑蛟蟲 ：可以穿透濾膜，也可以通過空氣傳播，低倍下為黑色點狀，高倍下可看見黑色的小蟲游來游去，培養(yǎng)液也是不渾的，一般不會太影響，細(xì)胞還是可以用的。常常是細(xì)胞生長狀態(tài)良好，且觀測到的運動物無明顯增多，且培養(yǎng)液顏色、透明度無明顯變化，可在同一批號的血清養(yǎng)的細(xì)胞中發(fā)現(xiàn)類似現(xiàn)象。

解決方法 ：對細(xì)胞生長狀態(tài)不會有明顯影響，在細(xì)胞增殖旺盛之后會自然消失，除更換血清外無須特殊處理。建議如果細(xì)胞有可能是此種污染的話，可以增加細(xì)胞的種板密度，以提高細(xì)胞的生存率。

5. ** ：一般培養(yǎng)液清亮，不變色，鏡下有絲狀物，有些**開始很像死細(xì)胞碎片，只是它很多很多的小塊很清楚，象珊瑚狀，不象細(xì)胞碎片分不清，慢慢的會長出很細(xì)的黑色絲狀物。**生長的比較慢，不象**那么容易被發(fā)現(xiàn)，但是一旦發(fā)現(xiàn)有它的存在細(xì)胞就被污染了，也很難救活了。

解決方法 ：果斷扔掉，然后徹底****培養(yǎng)間， CO?孵箱，器皿和培養(yǎng)液。

6. 原蟲 ：培養(yǎng)液可輕微渾濁，顯微鏡下那些細(xì)小的點狀物數(shù)量非常多，輕微活動，細(xì)胞雖然可以生長但繁殖速度卻明顯減慢，而且細(xì)胞狀態(tài)不好，邊緣不清楚，細(xì)胞不透亮。它們與細(xì)胞可共生但會與細(xì)胞爭奪營養(yǎng)。這種共生是非常普遍的，但它們的數(shù)量小，細(xì)胞占優(yōu)勢所以不會影響到細(xì)胞的正常生長，只有當(dāng)它們到達(dá)一定的數(shù)量時就會影響到 細(xì)胞 的生長，*終形成惡性循環(huán)。

污染的可能原因：可能原因很多比如配液**問題、操作問題、環(huán)境問題等等 。

關(guān)于培養(yǎng)基的無菌狀況，取培養(yǎng)基至培養(yǎng)瓶中（不加細(xì)胞），37度試培養(yǎng)一段時間后觀察。如果沒有**生長 就是操作的問題。 

也可以在培養(yǎng)基中事先加入雙抗（硫酸鏈霉素和氨芐青霉素）。但雙抗有時會影響細(xì)胞的狀態(tài)，所以在做轉(zhuǎn)染、檢測細(xì)胞某項指標(biāo)前一定要撤去雙抗，以避免影響實驗結(jié)果。  

1、孵箱應(yīng)定期用三氧機** 或者 紫外光照射，并用酒精和新潔爾滅試擦孵箱同時孵箱內(nèi)的水應(yīng)是三蒸水 

2、超凈臺\取材\器材\培養(yǎng)液\培養(yǎng)瓶\操作等因素 

3、超凈臺的風(fēng)機不能過大，風(fēng)機到6-8格。否則也可能能致霉菌污染 

4、無菌室經(jīng)甲醛熏蒸**后，可用同等量的氨水噴灑中和，約幾小時即可進(jìn)入操作。